Medios de Cultivo

 Medios de cultivo: tipos y tecnicas de preparacion

Para el aislamiento, estudio y clasificacion de los microorganismos, es necesario utilizer un medio de cultivo en el que dispongan de las sustancias organicas e inorganicas necesarias indispensables para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos medios, los microorganismos edemas de poder multiplicarse, pueden manifestar caracteristicas de crecimiento y propiedades bioquimicas; aspectos de gran importancia para su clasificacion. Estos preparados esteriles que poseen los elementos necesarios para el desarrollo de un microorganismo, se denominan medios de cultivos, los que según su estado fisico, pueden ser liquidos o solidos.

• Cultivo: es el resultado del crecimiento de un microorganismo o grupo de microorganismos.

• Cultivo puro: es el cultivo de una sole especie de microorganism° y su progenie (libre de todo contaminante). 

1. Caracteristicas que deben poseer los medios de cultivos:

• Contener sustancias nutritivas como: proteinas, azúcares, minerales y vitaminas.
• Tener un pH adecuado. 
• Ester esterilizados.

2. Ventajas al utilizar los medios de cultivos: 

• Permiten el aislamiento de un microorganismo a partir de un sustrato natural (suelo, agua, plantas, aire, excrementos, pus, etc.).
•  Permiten la identificacion del microorganismo, según las caracteristicas de crecimiento, morfologia celular, propiedades tintoriales y reacciones bioquimicas. 
• Conservación durante meses y anos de las cepas identificadas (cepario). 
• Obtención de celulas de microorganismos patógenos o de sus toxinas para la elaboracion de productos biologicos (vacunas, antitoxinas, etc.).

INTRODUCCIÓN O FUNDAMENTO

El agar es un elemento solid ificante muy empleado para la preparacion de medios de cultivo. Se licaa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con minimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de as bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en el.

"La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacion"

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hid ratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacion de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se anaden para pro,mover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
Tambien se ariaden colorantes que actilan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacion de acido como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH basico y amarillo en pH acido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

• Agar MacConkev. Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, as cuales inhiben la flora grampositiva. Los agentes del grupo coliforme dan colonias de color rojo, debido a quo fermentan la lactosa. En cambio, Salmonella y Shigella sp. forman colonias incoloras. 

• Agar Sabourad. Es un tipo de agar con peptopas, fue inventado por raymond S. en 1892. Se usa para cultivar dermatofitos y otros tipos de hongos. Contiene normalmente:

40 g/L glucosa
10 g/L pluripeptona
15 g/L agar
0,05 g/L [cloranfenicol]
pH 5.6

• Agar Nutritivo: Permanece sólido incluso a altas temperaturas, usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy util porque permanece solido incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias dificilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente (w/v):
  

0.5 % Peptona
0.3 % extracto de carne/extracto de levadura
1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
pH casi neutro (6.8) a 25 °C.

• Agar Sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:

alfa: halos verdosos (hemolisis parcial)
beta: halos incoloros (hemolisis total)
gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)


REACTIVOS
1.- Agar nutritivo
2.- Agar MacConkey ó  EMB
3.-Cinta testigo .-
4.-Agar dextrosa sabouraud
5.- Papel de estraza
6.- Algodón y gasa

PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar en unos matracas Erlenmeyer de 500 mi los agares como está indicado en el frasco.
2.- Taparlos con un algodón envuelto en la gasa lo más firme posible.
3.- Colocarle encima un gorrito de papel estraza y cinta testigo.
4.- Esterilizar en el autoclave como se indica en el frasco.
5.- Limpiar la mesa con unas pinzas que contengan una torunda grande con algún desinfectante.
 6.- Sacar el agar del autoclave, y quitarle el papel a las cajas petri, previamente esterilizadas.
7.- En las cajas patri vierta uno de los agares aproximadamente 20 ml en cada caja, con rapidez para evitar que soldifique inadecuadamente.
8.- Cuando el otro agar se encuentra a una temperatura que se pueda tocar con la mejilla, vacíe el 5% de sangre venosa, mezcle y vierta sobre las cajas. Espere a que soldifique.
9.- Colocar las cajas patri invertidas en el refrigerador.