martes, 31 de julio de 2012

Espermatobioscópia - Práctica

INTRODUCCIÓN O FUNDAMENTO


La concentración de espermatozoides es uno de los parámetros más importantes en la evaluación de la fertilidad masculina. Tradicionalmente, el recuento de espermatozoides se realiza utilizando la cámara de Neubauer que se ha convertido en el patrón de oro y el método recomendado por la Organización Mundial de la Salud (OMS).
La cámara Neubauer® tiene una profundidad de 0,1 mm. Consiste en 25 cuadrados grandes y 16 pequeños; cada cuadrado grande tiene 1 x 1 mm.
Como generalidad importante, debemos citar que en todos los casos, una vez llevemos a cabo el recuento de las células correspondientes en las regiones apropiadas de la cámara ( dependiendo del tipo celular objeto de estudio), los resultados deben ser referidos a un volumen ( lo conseguimos al conocer las dimensiones del retículo y la altura de la cámara) y al tiempo ser corregidos por el factor de dilución utilizado. Sólo de este modo expresaremos los resultados tal y como es debido:
Número de células / mm3.
Por otro lado, es necesario remarcar el amplio margen de error presentado por el método que nos ocupa en estos momentos. La técnica de recuento manual se caracteriza presentar un alto margen de error motivado por:
  • Errores en la práctica de la dilución. 
  • Contaminación del líquido de dilución. 
  • Error en el montaje y / o llenado de la cámara. 
  •  Error en los cálculos a realizar. o Error en el recuento propiamente dicha.
El margen de error puede disminuirse con una buen práctica y destreza del operador, pero existe una sistemática a seguir para evitar o disminuir el error en el recuento propiamente dicho, puesto que de no ser así, sería sencillo que una célula fuese contada por partida doble o a la inversa

MATERIAL:

SUSTANCIAS 


1.- Semen
2.- Cloruro de sodio 0.9%

ESPEMATOBIOSCÓPIA


PROCEDIMIENTO:

  • 1. Recoger una muestra de semen y tomar el tiempo de eyaculación y la hora en que llegó al laboratorio.  
  • 2. Anotar las características físicas.  
  • 3. Observe y anote el tiempo de licuefacción y coagulación.  
  • 4. En una pipeta serológica mida el volumen de la muestra. El volumen normal es de 2 a 5 ml de semen.  
  • 5. En un portaobjetos limpio pone una pequeña cantidad de muestra que se recubre con un cubreobjetos y se sella con parafina. Se examina al microscopio sacando el porcentaje de movilidad de espermatozoides, esperar 6 ú 8 hrs. para repetir la observación. Lo normal en la primer lectura es 69% y en la segunda de 25 a 40%. La vitalidad se lee 1 — 3 — 5 horas junto con la movilidad. 
  • 6. Hacer una estimación cualitativa de su movilidad como lo indican Watson y Robertson.  
  • 7.- Mezcle bien el semen y con una pipeta cuenta glóbulos absorber hasta la marca de 0.5 y diluir hasta la marca 11 con cloruro de Sodio 0.9%, o bien formol al 1% en citrato trisódico al 3%. Agite la ppipeta hasta que el líquido quede homogéneo se desecha el líquido del tallo y se monta en la cámara los espermas.  
  • 8.- Se cuentan en 4 mm2, ésta cifra multiplicada por 50,000 nos da el número de los espermatozoides por ml. Repítase por lo menos una vez todo el proceso y saque el promedio de los resultados. Los valores normales suelen ser entre 60 y 150 millones/ml. 
  • 9.- preparar unos frotis para observar la morfología. Normalmente deben encontrarse anomalías morfológicas (aproximadamente un 30%)