domingo, 14 de octubre de 2012

Reacción en cadena de la polimerasa










 CARÁCTER SEMI-CONSERVATIVO DE LA DNA



http://4.bp.blogspot.com/-4iPIeW2A_-0/TvB_XvBfWdI/AAAAAAAAABs/oFlrk30j4_c/s1600/dobleheliceadn.pngReacción en cadena de la polimerasa Entre las técnicas que se manejan en la biotecnología actual, una que ha sido de gran importancia y que se utiliza de manera cotidiana en los laboratorios de investigación y diagnóstico en el campo de la genética molecular, es la de reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés). Esta técnica permite obtener millones de copias de ADN a partir de un segmento determinado de esta molécula. La prueba de PCR fue diseñada en 1985 por el biólogo estadounidense Kary Mullis (1944- ), y ha sido tan importante para la biología mole-cular, que hizo a este científico merecedor del Premio Nobel en 1993. Gracias a ella se han podido llevar a cabo experimentos relevantes cuyos resultados fueron aplicados en la ingeniería genética. Un ejemplo de su aplicación es el proyecto genoma que hace pocos años nos reveló la secuencia completa del ADN humano. También mediante el uso de la prueba de PCR es posible efectuar las pruebas de paternidad, el diagnóstico prenatal de enfermedades de origen genético, los exámenes altamente sensibles para buscar genes del VIH, así como la determinación de la identidad de personas, vivas o fallecidas, entre otras aplicaciones. A grandes rasgos, los pasos en el proceso de la PCR son los siguientes: 

  • Se selecciona el segmento de ADN que se quiere amplificar. e La doble hélice de ADN se calienta aproximadamente a 98°C. Esto hace que las dos cadenas se separen. e Las cadenas se enfrían y se ponen en contacto los componentes necesarios para que se produzca una copia de cada una de las cadenas que se han separado: la enzima ADN polimerasa y cierta cantidad de nucleótidos libres, con nucleótidos iniciadores de cadena. 
  • La ADN polimerasa comienza a armar una nueva cadena de ADN, empezando por los iniciadores, y siguiendo con los nucleótidos que corresponden a las dos cadenas de ADN. 
  • Se forma una copia completa del segmento de ADN. Es decir que ahora se tienen dos moléculas de ADN iguales. 
  • Estas dos moléculas de ADN se so-meten de nuevo a la temperatura de 98°C. 
  • Las moléculas de ADN se vuelven a separar, y se ponen de nuevo en contacto con los iniciadores, la ADN polimerasa y la mezcla de nucleótidos libres. Se obtienen cuatro copias del ADN original. 
  • Se realiza de nuevo el ciclo de copia del ADN y se obtienen ocho copias de éste. o El proceso de calentamiento y en-friamiento se repite varias veces y se efectúan varios ciclos, hasta obtener un número considerable de copias del segmento original de ADN, que puede llegar a ser de mi-les o millones, según se requiera. Resumiendo, la prueba de PCR se basa en calentar al ADN para que las dos cadenas se separen. Luego, enfriar y proporcionar los elementos para que se produzca una copia de cada una de las dos cadenas, volver a calentar para que se separen las dos moléculas de ADN que se han forma-do y dejar que se copien de nuevo. Este proceso, repetido varias veces, nos puede proporcionar cientos o miles de copias de la misma secuencia de ADN
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